Caratterizzazione molecolare e citologica di mutanti di Arabidopsis thaliana

Nell'ambito del Progetto di Ricerca MIUR-PRIN "Controllo genetico ed epigenetico del numero e della fertilità degli ovuli in Arabidopsis" è stata effettuata l'analisi della funzione del gene AtMCC1, che codifica per una putativa acetilasi istonica, per quanto riguarda la fertilità dei gameti. In questo report è descritta l'attività sperimentale svolta grazie al supporto tecnico-scientifico basato sull'impiego di diverse metodologie: selezione in vitro di piante transgeniche di Arabidopsis, estrazione di acidi nucleici, PCR, qRT-PCR e analisi citologiche. Il materiale genetico è rappresentato dalle linee transgeniche di Arabidopsis caratterizzate dalla sovraespressione di AtMCC1, CaMV35S::AtMCC1, e dal silenziamento ottenuto tramite amiRNA di AtMCC1 e del suo paralogo. In particolare, sono state analizzate quattro linee CaMV35S::AtMCC1 e sei linee amiRNA. La caratterizzazione fenotipica dei mutanti ha riguardato principalmente la fase riproduttiva (produzione di polline e di semi), mentre l'analisi molecolare ha permesso di confermare la presenza dei transgeni e di confrontare i livelli trascrizionali di AtMCC1 e del paralogo nei mutanti rispetto ai controlli. Inoltre la caratterizzazione citologica ha consentito di accertare la presenza di una traslocazione in una linea silenziata e di anomalie nello sviluppo del sacco embrionale in una linea CaMV35S::AtMCC1.