Use of polymerase chain reaction and sandwich-hybridization for detection of artichoke mottled crinkle tombusvirus in artichoke

Zwei nicht radioaktive Methoden wurden für die Ermittlung des artichoke mottled crinkle Tombusvirus (AMCV) in Artischockenpflanzensaft angewandt. In der ersten Methode wurde eine Sandwich-Hybrjdisierungsmethode entwickelt, die einen mit Biotin versehenen Transkriptor als Empfänger und eine dioxigeninmarkierte Riboprobe anwendet. Die Hybride wurde an Nylonmembranen, die mit Streptavidin beschichtet worden waren, nach einem Dot-Blot Verfahren gesammclt. Die zweite Methode war die Reverse Transcriptional Polymerase. Chain Reaktion (RT-PCR), die mit drei verschiedenen, weit auseinander befindlichen Sequenzen des AMCV-Genoms Primer durchgeführt wurde. Im Artischockenpflanzensaft war RT-PCR 20-Each empfindhcher als die Sandwich-Hybridisierung und 2,5-fach weniger empfindlich als Dot-Blot-Hybridisierung mit radioaktivmarkierten Referentgruppen.

Two non-radioactive methods were applied for the detection of artichoke mottled crinkle tombusvirus (AMCV) in artichoke plant sap. A sandwich hybridization method was developed using a biotinylated transcript as capture and a digoxigenin-labelled riboprobe. The hybrid was collected onto Nylon membranes coated with streptavidin using a slot-blot procedure. The second method was the reverse transcriptional polymerase chain reaction (RT-PCR) carried out with three different primers obtained from widely, separated sequences of AMCV genome. In artichoke plant sap, RT-PCR was 20-fold more sensitive than sandwich-hybridization and 2.5-fold less sensitive than dor-blot hybridization labelled with radioactive reporter groups.