Tra le metodiche di screening da utilizzare on site, quelle basate sull'uso di dipstick o lateral flow devices sono attualmente le più diffuse per la determinazione rapida delle micotossine sottoposte a regolamentazione in cereali non processati. Prima del loro impiego, tuttavia, anche i metodi rapidi, come quelli convenzionali, devono essere sottoposti a esperimenti di validazione, al fine di valutare le loro caratteristiche analitiche. Le linee guida per la validazione dei metodi di screening per micotossine sono descritte nel recente Regolamento 519/2014/EU. Obiettivo del presente lavoro è stato quello di elaborare un disegno sperimentale per la validazione intra-laboratorio di un metodo rapido per la determinazione semi-quantitativa del deossinivalenolo (DON) in frumento duro, in accordo con le linee guida del suddetto Regolamento. Il metodo è basato su un test immunocromatografico a flusso laterale. Il disegno sperimentale applicato ha fornito informazioni sul profilo di precisione del metodo, sul cut-off e sulle percentuali di falsi positivi e falsi negativi. La precisione intermedia (riproducibilità intra-laboratorio) variava tra 16 e 28%. L'analisi della varianza (ANOVA) ha inoltre rivelato che, tra le varie sorgenti di errore considerate (variazione tra giorni, varietà di frumento, differenti lotti di produzione e ripetibilità) il maggiore contributo è rappresentato dalla ripetibilità. La percentuale di falsi positivi per campioni contaminati al di sotto del limite di legge è risultata inferiore all'1%, mentre la percentuale di falsi negativi per campioni contaminati al di sopra del limite di legge era 1.7%. Inoltre, è stato elaborato un disegno fattoriale per valutare quantitativamente l'influenza delle principali forme modificate del DON (3-acetil-DON, 15-acetil-DON e DON-3-glucoside) sui risultati del test, e in particolare sul rischio di falsi positivi. Infine, l'applicabilità del metodo validato a campioni reali è stata valutata mediante analisi di 47 campioni di frumento duro naturalmente contaminati. I risultati delle analisi hanno mostrato una buona correlazione (r = 0.87) con quelli ottenuti mediante un metodo di conferma LC-MS/MS.
Validazione di metodi di screening secondo il regolamento UE 519/2014. Caso studio: determinazione del deossinivalenolo in frumento mediante test immunocromatografico a flusso laterale.
B Ciasca;
2015
Abstract
Tra le metodiche di screening da utilizzare on site, quelle basate sull'uso di dipstick o lateral flow devices sono attualmente le più diffuse per la determinazione rapida delle micotossine sottoposte a regolamentazione in cereali non processati. Prima del loro impiego, tuttavia, anche i metodi rapidi, come quelli convenzionali, devono essere sottoposti a esperimenti di validazione, al fine di valutare le loro caratteristiche analitiche. Le linee guida per la validazione dei metodi di screening per micotossine sono descritte nel recente Regolamento 519/2014/EU. Obiettivo del presente lavoro è stato quello di elaborare un disegno sperimentale per la validazione intra-laboratorio di un metodo rapido per la determinazione semi-quantitativa del deossinivalenolo (DON) in frumento duro, in accordo con le linee guida del suddetto Regolamento. Il metodo è basato su un test immunocromatografico a flusso laterale. Il disegno sperimentale applicato ha fornito informazioni sul profilo di precisione del metodo, sul cut-off e sulle percentuali di falsi positivi e falsi negativi. La precisione intermedia (riproducibilità intra-laboratorio) variava tra 16 e 28%. L'analisi della varianza (ANOVA) ha inoltre rivelato che, tra le varie sorgenti di errore considerate (variazione tra giorni, varietà di frumento, differenti lotti di produzione e ripetibilità) il maggiore contributo è rappresentato dalla ripetibilità. La percentuale di falsi positivi per campioni contaminati al di sotto del limite di legge è risultata inferiore all'1%, mentre la percentuale di falsi negativi per campioni contaminati al di sopra del limite di legge era 1.7%. Inoltre, è stato elaborato un disegno fattoriale per valutare quantitativamente l'influenza delle principali forme modificate del DON (3-acetil-DON, 15-acetil-DON e DON-3-glucoside) sui risultati del test, e in particolare sul rischio di falsi positivi. Infine, l'applicabilità del metodo validato a campioni reali è stata valutata mediante analisi di 47 campioni di frumento duro naturalmente contaminati. I risultati delle analisi hanno mostrato una buona correlazione (r = 0.87) con quelli ottenuti mediante un metodo di conferma LC-MS/MS.I documenti in IRIS sono protetti da copyright e tutti i diritti sono riservati, salvo diversa indicazione.
