Immunofluorescenza e microscopia confocale per lo studio ex-vivo dello stroma corneale

SCOPO: In questo lavoro si presenta uno studio dello stroma corneale volto all'identificazione delle diverse tipologie di collagene che compongono i vari strati, con particolare attenzione alla descrizione dello strato di Dua. MATERIALI E METODI: L'analisi è stata condotta su cornee sane e patologiche che, dopo fissazione e taglio al criostato, sono state colorate con marcatori fluorescenti specifici per varie componenti stromali, sia cellulari sia extracellulari. La tecnica utilizzata per la colorazione è l'immunofluorescenza, che consente di ottenere una marcatura altamente selettiva per il target di interesse. L'analisi è stata successivamente eseguita grazie all'utilizzo di un microscopio confocale laser, che consente di ottenere immagini rappresentative della distribuzione dei marcatori nel tessuto esaminato. RISULTATI: È stata studiata la distribuzione del collagene I e del collagene VI nei vari strati della cornea, in particolare a livello pre-descemetico in quanto questa zona è oggetto di interesse per l'identificazione dello strato di Dua. Una prima analisi, condotta sulla base della letteratura e quindi rivolta principalmente allo studio del collagene VI, sembrava non riportare variazioni significative della distribuzione di questo marcatore a livello pre-descemetico. Successivamente, l'analisi del collagene I ha invece consentito di identificare lo strato di Dua, anche se non in tutti i campioni esaminati. CONCLUSIONI: Lo strato di Dua non è sempre facilmente identificabile mediante l'analisi della distribuzione del collagene I e VI. L' estrema variabilità dei campioni richiede uno studio di lunga durata che possa rendere conto delle differenze dovute alle diverse caratteristiche dei pazienti, quali età e sesso, e alle diverse patologie.