Analisi multimicotossina LC-MS/MS in cereali e mangimi: confronto di differenti approcci di estrazione, purificazione e calibrazione

Twelve approaches currently used for the simultaneous LCMS/ MS determination of the principal mycotoxins in cereal food and feed materials were tested. The method based on the extraction with methanol-water (70+30, v/v), clean-up with two multi-antibody immunoaffinity columns coupled in tandem was validated for corn, rice and feed spiked at low, medium and high levels of mycotoxins gave the best results. To study the matrix effect two types of calibration curves were prepared in pure solvent with and without the addition of 13C-labelled mycotoxin standards. For corn and rice spiked at low levels a significant matrix effect was observed and needed to be compensated by using calibration curves with 13C-labelled standards. At medium and high spiking levels no matrix effect was observed therefore mycotoxins were readily quantified by using external calibration curves. Although the LC-MS/MS method validated herein need some minor improvements it was successfully tested in four proficiency tests for the determination of the above mentioned mycotoxins in buckwheat, corn, rice and feed giving acceptable values of z-score for 97% of results.

Abbiamo confrontato 12 approcci diversi per la determinazione LC-MS/MS delle principali micotossine in cereali e mangimi. Il metodo che forniva i migliori risultati si basa sull'estrazione degli analiti con MeOH-acqua (70+30, v/v) e purificazione con colonnine ad immunoaffinità multi-anticorpo. Il metodo è stato validato per mais, riso e mangime fortificati a 3 livelli di micotossine (bassi, medi e alti). Per studiare l'effetto matrice abbiamo confrontato i risultati ottenuti con curve di calibrazione in solvente puro con e senza l'aggiunta di standard di micotossine marcate con 13C. Per mais e riso fortificati a bassi livelli è stato osservato un effetto matrice significativo che abbiamo compensato utilizzando la calibrazione con standard marcati. A livelli medi e alti l'effetto matrice era trascurabile e non richiedeva la compensazione con curve di calibrazione con standard marcati. Sebbene il metodo proposto necessiti di ulteriori miglioramenti in termini di accuratezza e precisione, è stato testato con successo in quattro Proficiency test in grano saraceno, mais, riso e mangime fornendo valori di z-score accettabili per il 97% dei risultati.